員工頂撞上司不可以罰款。個人的單位沒有罰款的權利，只有行政機關有。且對上司的頂撞屬於個人道德問題，不是違法的問題，所以不存在罰款的情形。即便是頂撞上司違反單位的規章制度，且規章制度明確這樣要罰款，也不能罰款，單位的規章制度不能違反法律強制性規定。《勞動法》第五十六條勞動者在勞動過程中必須嚴格遵守安全操作規程。勞動者對用人單位管理人員違章指揮、強令冒險作業，有權拒絕執行;對危害生命安全和身體健康的行爲，有權提出批評、檢舉和控告。
